Sistema diagnostico ELISA Kit For Chicken Pork Duck 96 Wells/Kit Sensitivity di MQCA 0,5 Ppb

MQCA ELISA Test Kit per Pollo Maiale Anatra 96 ​​pozzetti/Kit Sensibilità 0,5 ppb

1. Principio

Questo kit di test si basa sul dosaggio immunoenzimatico competitivo per la rilevazione di MQCA nel campione.Gli antigeni di accoppiamento sono pre-rivestiti sulle strisce dei micropozzetti.L'MQCA nel campione e gli antigeni di accoppiamento pre-rivestiti sulle strisce dei micropozzetti competono per l'anticorpo anti-MQCA.Dopo l'aggiunta del coniugato enzimatico, viene aggiunto il substrato TMB per la colorazione.Il valore di densità ottica (OD) del campione ha una correlazione negativa con l'MQCA in esso contenuto.Questo valore viene confrontato con la curva standard e successivamente si ottiene la concentrazione di MQCA.

2. Specifiche tecniche

Sensibilità: 0,5 ppb
Temperatura dell'incubatore: 25 ℃
Tempo di incubazione: 30min～15min

Limite di rilevamento:
Tessuto 1 ppb

Tasso di reazione incrociata:
MQCA 100%
Olaquindox <0,1%
Tasso di recupero:
Tessuto 85%±10%

3. Componenti

4. Materiali richiesti ma non forniti

1) Attrezzature: lettore di micropiastre (450 nm / 630 nm), omogeneizzatore, oscillatore, centrifuga, pipette di misurazione, dispositivo di essiccazione dell'azoto e bilancia (una sensibilità reciproca di 0,01 g), incubatore.
2) Micropipettatrici: monocanale da 20 a 200 µL e da 100 a 1000 µL e multicanale da 30～300 µl;
3) Reagenti: Acetato di etile, n-esano, HCl, NaCl, CH3CN

5. Pretrattamento del campione

Istruzioni
I seguenti punti devono essere trattati prima del pretrattamento di qualsiasi tipo di campione:
1) Per gli esperimenti possono essere utilizzati solo i puntali monouso e i puntali devono essere cambiati quando vengono utilizzati per assorbire reagenti diversi;
2) Prima dell'esperimento, ogni utensile sperimentale deve essere controllato per essere pulito e dovrebbe essere ripulito se necessario, al fine di evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.

preparazione del campione
1) Estratto del campione (conservare a 2 ~ 8 ℃ per 1 mese): prendere 8,6 ml di HCl concentrato, aggiungere acqua deionizzata a 500 ml, quindi aggiungere 10 g di NaCl per ottenere l'estratto del campione.

5.1 Tessuto di bestiame e pollame (pollo, anatra, maiale):
1. Prelevare 2 ± 0,05 g del campione omogeneizzato in una provetta da centrifuga da 50 ml;
2. Aggiungere 4 ml di estratto del campione, agitare bene per 1 minuto;
3. Aggiungere 4 ml di acetato di etile e 2 ml di CH3CN, agitare bene per 10 secondi;Centrifugare a 4000 giri/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) per 10 min (Nota: questo passaggio richiede solo agitazione per 10 secondi, agitare troppo a lungo porterà all'emulsione, se appare l'emulsione, prendere un certo supernatante, quindi agitare leggermente la provetta per 5 secondi , centrifugare di nuovo quindi può ottenere abbastanza supernatante);
4. Portare 3 mL di fase organica dello strato superiore in un contenitore trasparente, sotto per asciugare con azoto o aria a
bagno d'acqua 56℃;
5. Aggiungere 1 ml di N-esano, agitare per 30 secondi, quindi aggiungere 0,5 ml di soluzione di ridissoluzione, agitare e miscelare accuratamente per 30 secondi;centrifugare a 4000 giri/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) per 5 min.
6. Rimuovere la fase organica dello strato superiore.Prendere 50 µL dello strato inferiore per l'analisi.
Piega di diluizione del campione:0,5

6. Procedure ELISA

6.1 Istruzioni
1) Portare tutti i reagenti e le microstrisce a temperatura ambiente (20-25 ℃) prima dell'uso;
2) Riportare tutti i reagenti a 2-8 ℃ immediatamente dopo l'uso;
3) La riproducibilità dell'analisi ELISA, in larga misura, dipende dalla consistenza del lavaggio delle lastre.Il corretto funzionamento del lavaggio delle lastre è il punto chiave nelle procedure di ELISA;
4) Per l'incubazione a temperatura costante, tutti i campioni ei reagenti devono evitare l'esposizione alla luce e ogni micropiastra deve essere sigillata dalla membrana di copertura.

6.2 Procedure operative
1) Estrarre tutti i reagenti necessari e metterli a temperatura ambiente (20-25 ℃) per almeno 30 minuti.Si noti che ogni reagente deve essere agitato per miscelare uniformemente prima dell'uso;
2) Prendere le strisce di micropozzetti e i telai delle piastre richiesti.Risigillare la micropiastra inutilizzata, conservata a 2-8 ℃;
3) Preparazione della soluzione: diluire 40 mL del tampone di lavaggio concentrato 20× con acqua deionizzata a 1:19 (1 parte di tampone di lavaggio concentrato 20× + 19 parti di acqua deionizzata), oppure preparare la quantità necessaria;
4) Numerazione: numerare i micropozzetti in base ai campioni e alla soluzione standard;ogni campione e soluzione standard deve essere eseguito in duplicato;registrare le loro posizioni;
5) Preparare la soluzione di miscelazione della soluzione di lavoro dell'anticorpo e del coniugato enzimatico concentrato: miscelare uniformemente la soluzione di lavoro dell'anticorpo e il coniugato enzimatico concentrato a 10:1 (soluzione di lavoro dell'anticorpo da 1000 ul + coniugato enzimatico concentrato 100ul, questa soluzione della miscela deve essere utilizzata una volta preparata, non può essere memorizzato, la quantità del pacchetto ha un importo extra, preparare come proporzione è OK.)
6) Aggiungere 20 µL del campione o della soluzione standard per separare i pozzetti duplicati, quindi aggiungere 70 µL della soluzione di miscelazione della soluzione di lavoro dell'anticorpo e del coniugato enzimatico concentrato in ciascun pozzetto.Miscelare agitando delicatamente, sigillare la micropiastra con la membrana di copertura e incubare a 25℃ al buio per 30 min;
7) Lavare la micropiastra con il tampone di lavaggio a 250 µL/pozzetto per quattro o cinque volte;bagnare bene la pozzetto con il tampone di lavaggio per 15-30 sec, sbattere ad asciugare con carta assorbente (se ci sono le bolle dopo lo sbattimento tagliarle con le punte pulite);
8) Colorazione: aggiungere 50 µL della soluzione di substrato A e 50 µL della soluzione B in ciascun pozzetto.Mescolare agitando delicatamente e incubare a 25 ℃ per 15 minuti al buio per la colorazione;
9) Determinazione: aggiungere 50 µL di soluzione di stop in ciascun pozzetto.Mescolare agitando delicatamente.Impostare la lunghezza d'onda del lettore di micropiastre a 450 nm per determinare il valore OD.(si consiglia di leggere il valore OD alla doppia lunghezza d'onda 450/630 nm entro 5 min) .

7. Giudizio sul risultato

Esistono due metodi per giudicare i risultati;il primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa.Si noti che il valore OD del campione ha una correlazione negativa con il contenuto di MQCA.

7.1 Determinazione qualitativa
L'intervallo di concentrazione (ng/mL) può essere ottenuto confrontando il valore medio di OD del campione con quello della soluzione standard.Assumendo che il valore di OD del campione Ⅰ sia 0.3, e quello del campione Ⅱ sia 1.0, mentre quelli delle soluzioni standard sono i seguenti: 2.043 per 0 ppb, 1.716 per 0.5 ppb, 1.215 per 1.5 ppb, 0.74 per 4.5 ppb, 0,313 per 13,5 ppb e 0,155 per 40,5 ppb, di conseguenza l'intervallo di concentrazione del campioneⅠè compreso tra 13,5 e 40,5 ppb e quello del campione Ⅱ è compreso tra 1,5 e 4,5 ppb.

7.2 Determinazione quantitativa
I valori medi dei valori di assorbanza equivalgono alla percentuale del valore OD medio (B) del campione e della soluzione standard diviso per il valore OD (B0) della prima soluzione standard (0 standard) e successivamente moltiplicato per 100% , questo è,

B: il valore OD medio (doppio pozzetto) del campione o della soluzione standard
B0: il valore medio di DO della soluzione standard da 0 ng/mL
Disegnare la curva standard con le percentuali di assorbimento delle soluzioni standard e i valori semilogaritmici delle soluzioni standard MQCA (ng/mL) come asse Y e X, rispettivamente.Leggere la corrispondente concentrazione del campione dalla curva standard incorporando la sua percentuale di assorbimento nella curva standard.Il valore risultante viene successivamente moltiplicato per la corrispondente piega di diluizione, ottenendo così la concentrazione di MQCA nel campione.
L'utilizzo del software di analisi professionale di questo kit sarà più conveniente per l'analisi accurata e rapida di una grande quantità di campioni.(Vi preghiamo di contattarci per questo software)

8. Precauzioni

1. La temperatura ambiente inferiore a 25 ℃ o la temperatura dei reagenti e dei campioni non riportati alla temperatura ambiente (20-25 ℃) porteranno a un valore OD standard inferiore
2. La secchezza della micropiastra durante il processo di lavaggio sarà accompagnata da situazioni che includono curve standard non lineari e riproducibilità indesiderata
3. Miscelare ogni reagente e miscela di reazione in modo uniforme e lavare accuratamente la micropiastra, altrimenti si verificherà una riproducibilità indesiderata
4. La soluzione di arresto è la soluzione di acido solforico 2 M, evitare il contatto con la pelle;
5. Mettere la micropiastra inutilizzata in un sacchetto autosigillante per richiuderla.La sostanza standard e il formatore di colore incolore sono fotosensibili e quindi non possono essere esposti direttamente alla luce
6. Non utilizzare il kit oltre la data di scadenza.L'uso di reagenti diluiti o adulterati dai kit porterà a cambiamenti nella sensibilità e nei valori di OD rilevabili.Non scambiare i reagenti dei kit con numeri di lotto diversi da utilizzare
7. Eliminare la soluzione colorante con qualsiasi colore che indichi la degenerazione di questa soluzione.Il valore di rilevamento della soluzione standard 0 inferiore a 0,5 indica la sua degenerazione
8. La temperatura di reazione ottimale è di 25 ℃ e temperature troppo alte o troppo basse comporteranno cambiamenti nella sensibilità di rilevamento e nei valori OD.

9. Data di conservazione e scadenza

Conservazione: conservare a 2-8 ℃, non congelato.
Data di scadenza: 12 mesi;la data di produzione è sulla scatola.
Nota: se la confezione sottovuoto della micropiastra presenta perdite, è ancora valida per l'uso, non influisce sul risultato del test, rilassati per l'uso.

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