Sensibilità diagnostica 96Wells/Kit del nitrofurano AMOZ 0.03ppb ELISA Kit For Milk Food Safety del gamberetto

Nitrofuran AMOZ Kit diagnostico ELISA per sensibilità al latte 0,03ppb 96 pozzetti/kit

 

1.Kit diagnostico ELISAPrincipio

Questo kit di rilevamento si basa su un immunodosaggio enzimatico competitivo per il rilevamento di AMOZ nei campioni.Gli antigeni coniugati sono pre-rivestiti su strisce di micropozzetti.L'AMOZ nel campione compete con l'antigene coniugato prerivestito sulla striscia di micropozzetti per l'anticorpo anti-AMOZ.Dopo l'aggiunta del coniugato enzimatico, viene aggiunto il substrato TMB per la colorazione.Il valore di densità ottica (OD) di un campione è correlato negativamente con l'AMOZ in esso contenuto.Questo valore viene confrontato con una curva standard e successivamente si ottiene la concentrazione di AMOZ.

 

2. Specifiche tecniche

 

Sensibilità: 0,03ppb

Temperatura di incubazione: 25 ℃

Tempo di incubazione: 30min～15min

Limite di rilevamento Tessuto, uova, miele: 0,1ppb

Tasso di reazione incrociata

AMAZ 100%

AHD <0,1%

AZ < 0,1%

SEM < 0,1%

Tasso di recupero

Tessuto 80 ± 25%

Miele 75 ± 25%

Uovo 95 ± 25%

 

3.Nitrofuran AMOZ ELISA Kit di test per la sicurezza alimentareComponenti

 

1	Strisce di micropozzetti	12 strisce di cui 8 rimovibili pozzi ciascuno
2	6× soluzione standard (1 mL ciascuna)	0ppb	0,03 ppm
		0,09 ppm	0,27 ppm
		0,81 ppm	2,43 ppm
3	Coniugato enzimatico	7ml	tappo rosso
4	Soluzione di lavoro anticorpale	7 ml	berretto blu
5	Substrato A	7 ml	cappello bianco
6	Substrato B	7 ml	berretto nero
7	Fermare la soluzione	7 ml	tappo giallo
8	Tampone di lavaggio concentrato 20×	40 ml	cappello bianco
9	2 × soluzione di ridissoluzione concentrata	50ml	tappo trasparente
10	2-nitrobenzaldeide (C7H5NO3)	2-nitrobenzaldeide (C7H5NO3)	2-nitrobenzaldeide (C7H5NO3)

 

 

4. Materiali richiesti ma non forniti
1) Attrezzatura: lettore di micropiastre, stampante, omogeneizzatore, essiccatore di azoto, vortex, centrifuga, tubo di misurazione, bilancia (reciproco 0,01 g), incubatore, bagnomaria;
2) Micropipette: monocanale 20-200µL, 100-1000µL, multicanale 30-300µl;
3) Reattivi: NaOH, acetato di etile, n-esano, HCl (circa 36,5%), K2HPO4 · 3H2O

5. Preparazione del campione

istruire
I seguenti punti devono essere affrontati prima di qualsiasi tipo di pretrattamento del campione:
1) L'esperimento può utilizzare solo puntali monouso e i puntali devono essere sostituiti durante l'aspirazione di reagenti diversi;
2) Prima dell'esperimento, ogni attrezzatura sperimentale deve essere pulita e ripulita se necessario per evitare che la contaminazione interferisca con i risultati sperimentali.

Preparazione della soluzione prima del pretrattamento del campione:
1) K2HPO4 0,1 M: Sciogliere 11,4 g di K2HPO4 3H2O in acqua deionizzata fino a 500 mL.
2) 1 M HCl: Sciogliere 8,6 mL di HCl (circa 36,5%) in acqua deionizzata fino a 100 mL.
3) NaOH 1 M: Sciogliere 4 g di NaOH in acqua deionizzata fino a 100 mL.
4) Diluire 2 volte la soluzione di ridissoluzione concentrata con acqua deionizzata a 1:1 (1 mL di soluzione di ridissoluzione concentrata + 1 mL di acqua deionizzata) per la ridissoluzione del campione.

 

5.1 Preparazione del campione

un)Fazzoletto di carta, uova
1) Pesare 1±0,05 g di campione omogeneo, aggiungere 4 mL di acqua distillata, 0,5 mL di HCl 1 M e 100 µL di 2-nitrobenzaldeide (C7H5NO3) in ciascuna provetta e agitare adeguatamente per 2 minuti;
2) Incubare per una notte a 37°C (circa 16 ore) o in bagnomaria a 56°C (2 ore).
3) Aggiungere 5 ml di K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml di NaOH 1 M e 6 ml di acetato di etile in ciascuna provetta e agitare per 30 secondi.
4) Centrifugare a temperatura ambiente (20-25°C) sopra 4000 giri/min per 10 minuti (se c'è emulsione o lo strato di acetato di etile è inferiore a 3 ml, incubare il campione in un bagno d'acqua a 80°C per 10 minuti e centrifugare ripetutamente; o aumentare la velocità e prolungare il tempo di centrifugazione).
5) Trasferire lo strato di acetato di etile da 3 mL in una nuova provetta da centrifuga ed evaporare a secchezza con azoto o aria a 50°C.
6) Sciogliere il residuo essiccato in 2 mL di n-esano, aggiungere 1 mL della soluzione ricostituita diluita, agitare bene per 30 secondi, centrifugare a temperatura ambiente (20-25°C) ad una velocità superiore a 4000 rpm per 10 minuti;rimuovere la fase n-esano superiore.(Se si verifica l'emulsione, rimuovere la fase superiore n-esano, incubare il campione in un bagno d'acqua a 70°C per 10-20 minuti e centrifugare ripetutamente).
7) Prendere 50 µL dello strato inferiore per l'analisi.
Fattore di diluizione del campione: 2

b) miele
1) Pesare 2±0,05 g di campione omogeneo (miele), aggiungere 4 mL di acqua distillata, 0,5 mL di HCl 1 M e 100 µL di 2-nitrobenzaldeide (C7H5NO3) in ciascuna provetta, agitare adeguatamente per 2 minuti;
2) Incubare per una notte a 37°C (circa 16 ore) o in bagnomaria a 56°C (2 ore).
3) Aggiungere 5 ml di K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml di NaOH 1 M e 6 ml di acetato di etile in ciascuna provetta e agitare per 30 secondi.
o aumentare la velocità e prolungare il tempo di centrifugazione).
5) Trasferire lo strato di acetato di etile da 3 mL in una nuova provetta da centrifuga ed evaporare a secchezza con azoto o aria a 50°C.
6) Sciogliere il residuo essiccato in 2 mL di n-esano, aggiungere 1 mL di soluzione ricostituita diluita, miscelare bene per 30 secondi, centrifugare a temperatura ambiente (20-25°C) ad una velocità di 4000 giri/min o più per 10 minuti;rimuovere la fase n-esano superiore.(Se si verifica l'emulsione, rimuovere la fase superiore n-esano, incubare il campione in un bagno d'acqua a 70°C per 10-20 minuti e centrifugare ripetutamente).
7) Prendere 50 µL dello strato inferiore per l'analisi.
Fattore di diluizione del campione: 1

 

 

6. Procedura ELISA

6.1 Descrizione
1) Portare tutti i reagenti e le strisce di micropozzetti a temperatura ambiente (20-25°C) prima dell'uso;
2) Riporre tutti i reagenti a 2-8°C subito dopo l'uso;
3) La riproducibilità dei test ELISA dipende in gran parte dalla consistenza del lavaggio delle piastre.Il corretto funzionamento del lavaggio delle lastre è la chiave della procedura ELISA;
4) Durante l'incubazione a temperatura costante, tutti i campioni ei reagenti devono essere protetti dalla luce e ogni micropiastra deve essere sigillata con una pellicola di copertura.

6.2 Procedura Operativa
1) Mettere il kit a temperatura ambiente (20-25°C) per almeno 30 minuti, notare che ogni reagente deve essere agitato e miscelato bene prima dell'uso e inserire le strisce di micropozzetti richieste nel telaio della piastra.Le micropiastre non utilizzate devono essere richiuse e conservate a 2-8°C, non congelate.
2) Preparazione della soluzione: 40 mL di 20 × tampone di lavaggio concentrato diluito 1:19 con acqua deionizzata (1 parte 20 × tampone di lavaggio concentrato + 19 parti di acqua deionizzata).O preparare secondo necessità.
3) Numerazione: numerare i micropozzetti in base ai campioni e alle soluzioni standard;ogni campione e soluzione standard devono essere prodotti in duplicato e le loro posizioni devono essere registrate.
4) Aggiungere 50 µl di campione o soluzione standard in pozzetti replicati separati;aggiungere 50 ul di coniugato enzimatico a ciascun pozzetto, quindi aggiungere 50 µL di soluzione di lavoro dell'anticorpo e agitare la piastra a mano per miscelare delicatamente.Sigillare la micropiastra con una pellicola di copertura e incubare a 25°C per 30 minuti.
5) Versare il liquido nel micropozzetto, asciugare tamponando su carta assorbente, aggiungere 250 µL/pozzetto di tampone di lavaggio per lavare la micropiastra per 15-30 secondi, quindi rimuovere e asciugare tamponando con carta assorbente, ripetere 4-5 volte.(Se ci sono bolle d'aria dopo aver picchiettato, tagliarle con una punta pulita).
6) Sviluppo del colore: aggiungere 50 µL di Substrato A a ciascun pozzetto, seguiti da 50 µL di Substrato B. Miscelare delicatamente agitando manualmente la piastra, quindi incubare al buio a 25 °C per 15 min per sviluppare il colore.
7) Saggio: aggiungere 50 μL di soluzione di arresto in ciascun pozzetto.Mescolare delicatamente agitando a mano il piatto.Impostare la lunghezza d'onda del lettore di micropiastre a 450 nm per determinare il valore OD di ciascun pozzetto.(Si consiglia di leggere i valori OD a doppia lunghezza d'onda 450/630 nm entro 5 minuti).

 

7. Giudizio sul risultato

 

Esistono due metodi per giudicare i risultati: il primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa.Si noti che il valore OD del campione ha una correlazione negativa con la concentrazione di AMOZ.

7.1 Determinazione qualitativa

L'intervallo di concentrazione (ng/mL) di AMOZ può essere ottenuto confrontando il valore medio di OD del campione con quello della soluzione standard.Supponendo che il valore OD del campioneⅠ sia 0,3 e quello del campioneⅡ sia 1,0, il valore OD delle soluzioni standard è: 2,243 per 0 ppb, 1,816 per 0,03 ppb, 1,415 per 0,09 ppb, 0,74 per 0,27 ppb, 0,313 per 0,81 ppb , 0,155 per 2,43 ppb, di conseguenza l'intervallo di concentrazione del campioneⅠ è compreso tra 0,81 e 2,43 ppb e quello del campioneⅡ è compreso tra 0,09 e 0,27 ppb.

7.2 Determinazione quantitativa

I valori medi dei valori di assorbanza si ottengono per il valore di DO medio (B) del campione e della soluzione standard diviso per il valore di DO (B0) della prima soluzione standard (standard 0) e successivamente moltiplicato per 100%, ovvero ,

Percentuale del valore di assorbanza =	B	×100%
	B0

B: il valore medio di DO del campione o della soluzione standard

B0: il valore medio di DO della soluzione standard da 0 ng/mL

Disegnare la curva standard con le percentuali di assorbimento della soluzione standard e i valori semilogaritmici della soluzione standard AMOZ (ng/mL) come asse Y e X, rispettivamente.Leggere la corrispondente concentrazione del campione dalla curva standard incorporando la sua percentuale di assorbimento nella curva standard.Il valore risultante viene successivamente moltiplicato per la corrispondente piega di diluizione, ottenendo infine la concentrazione di AMOZ nel campione.

 

8. Questioni che richiedono attenzione
1) La temperatura ambiente è inferiore a 25 ℃ o la temperatura del reagente e il campione non sono tornati alla temperatura ambiente (20-25 ℃), il che causerà una diminuzione del valore OD standard.
2) Durante il processo di lavaggio, l'asciugatura della micropiastra sarà accompagnata dalla non linearità della curva standard e dalla riproducibilità insoddisfacente;quindi, procedere alla fase successiva subito dopo il lavaggio.
3) Mescolare bene, altrimenti ci sarà scarsa riproducibilità.
4) La soluzione di arresto è una soluzione di acido solforico 2 M, evitare il contatto con la pelle.
5) Non utilizzare il kit oltre la data di scadenza.L'uso di reagenti diluiti o adulterati del kit può causare variazioni della sensibilità e dei valori di rilevamento OD.Non sostituire i reagenti di diversi lotti di kit.
6) Richiudere le micropiastre non utilizzate in sacchetti autosigillanti.Le soluzioni standard e gli accoppiatori incolori sono sensibili alla luce e non possono essere esposti direttamente alla luce.
7) Eliminare qualsiasi soluzione colorante il cui colore indica che la soluzione si è degradata.Un valore di rilevamento inferiore a 0,5 per la soluzione standard 1 (0 ppb) indica degradazione.
8) La temperatura di reazione ottimale è di 25 ℃ e la sensibilità di rilevamento e il valore OD cambieranno se la temperatura è troppo alta o troppo bassa.
 

9. Conservazione e periodo di validità
Conservazione: Conservare a 2-8°C, non congelare.
Data di scadenza: 12 mesi;la data di produzione è sulla scatola.
Nota: se la confezione sottovuoto della micropiastra perde, può comunque essere utilizzata senza influire sui risultati del test, quindi è possibile utilizzarla con sicurezza.

 

 

Q1: Quando verrà spedito?
A1: Spediremo la merce il prima possibile entro 7 giorni lavorativi dopo aver ricevuto il pagamento.(In caso di fattori esterni come l'epidemia, la consegna potrebbe essere ritardata)

 

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