La prova porcina Kit Antibody ELISA Diagnostic 192 di influenza di maiali di GB di malattia di Aujeszky di PRV scaturisce/corredo GMP

Pseudorabies suina gB Anticorpo ELISA Test Kit 192 Pozzetti/Kit GMP

 

1. Utilizzo

Il kit per il test ELISA degli anticorpi GreenSpring® Pseudorabies suina (PRV) viene utilizzato per il rilevamento dell'anticorpo gB Pseudorabies suina nel siero suino;valutazione delle condizioni di immunità nei confronti della pseudorabbia suina nell'allevamento di suini e studio dell'epidemiologia della pseudorabbia suina.Sebbene il risultato non sia in grado di distinguere l'anticorpo immunitario e l'anticorpo infettivo, per confermare che l'anticorpo è un vaccino o un'infezione da virus selvaggio è necessario combinare dati clinici, stato immunitario e altri metodi diagnostici.

 

2. Principio

Il kit per il test ELISA degli anticorpi GreenSpring® Porcine Pseudorabies (PRV) gB è costituito da una micropiastra rivestita di antigene (rivestita con antigene PRV) e altri reagenti.Applica il principio ELISA in fase solida all'Ab PRV nel siero, quindi aggiunge il coniugato enzimatico per legarsi specificamente con il complesso di antigene rivestito + Ab PRV + anticorpo anti-IgG marcato con enzima sulla micropiastra.Con il substrato TMB, genererà una quantità di colore.L'intensità del colore è relativa al contenuto di PRV-Ab, quando il valore del colore è maggiore del valore di cut-off, i suini sono vaccinati bene o esistono infetti naturali.

 

3. I componenti del kit

 

1	Micropiastra rivestita con antigene PRV-gB	96X2
2	Coniugato enzimatico	22 ml	coperchio giallo
3	Soluzione diluente del campione	50 ml	coperchio trasparente
4	Siero di controllo PRV-IgG negativo	1,5 ml	coperchio verde
5	PRV-IgG Siero di controllo positivo	1,5 ml	coperchio rosso
6	Substrato	12 ml X2	coperchio arancione
7	Fermare la soluzione	12 ml	coperchio blu
8	Tampone di lavaggio concentrato 20×	50 ml	coperchio bianco
9	Pellicola adesiva	6 pezzi
10	Istruzione	1 pezzo

 

4. Materiali richiesti ma non forniti

1) Lettore di micropiastre (lunghezza doppia onda: 450/630 nm).
2) Micropipetta precisa (canale singolo 1-100ul, 0,5-10ul, multicanale 30-300ul)
3) Scatola a temperatura costante o scatola a bagnomaria.
4) Oscillatore.
5) Rondella per micropiastre.
6) Puntali monouso (10ul, 200ul)
7) Acqua deionizzata

 

5. Requisito del campione

1) I campioni sono siero suino, che deve essere raccolto senza batteri.Il tempo di conservazione dovrebbe essere inferiore a 1 settimana a 2-8 ℃, se a lungo termine dovrebbe essere mantenuto a -20 ℃.
2) Evitare di utilizzare campioni con grave emolisi, precipitati, contaminati da batteri o sospensioni proteiche.
3) L'EDTA, l'eparina sodica e altri anticoagulanti non influiranno sui risultati.

 

6. Preparazione

1) Portare i reagenti ELISA a temperatura ambiente (20-25 ℃) per 30 minuti per ottenere i migliori risultati.
2) Campione diluito: diluire il campione con il diluente del campione a 40 volte. (Ci sarà un cambiamento di colore dopo l'aggiunta della soluzione), il campione diluito deve essere miscelato uniformemente per ottenere risultati migliori.
3) Preparazione della soluzione di lavaggio: diluire 20 volte il tampone di lavaggio concentrato con acqua deionizzata.

 

7. Procedura

1) Estrarre le lastre rivestite (possono essere staccate) e registrare la posizione del campione su un foglio di lavoro.Impostare 2 pozzetti per il siero di controllo negativo, aggiungere il siero di controllo negativo non diluito, 2 pozzetti per il siero di controllo positivo, aggiungere il siero di controllo positivo non diluito, 100μL/pozzetto.Altri sono pozzetti campione, aggiungere il campione diluito, 100 μL ciascuno (sia il test a pozzetto singolo che quello a pozzetto doppio sono OK).
2) Mescolare delicatamente, coprire e incubare a 37℃ per 30 min.
3) Rimuovere la pellicola adesiva.Versare il liquido fuori dai pozzetti, aggiungere completamente il tampone di lavaggio diluito in ogni pozzetto, versare direttamente, non è necessario essere statici.Ripetere 3 volte, alla fine tamponare per asciugare su carta assorbente.
4) Aggiungere 100μL di coniugato enzimatico in ciascun pozzetto.
5) Coprire la piastra con una nuova pellicola adesiva. Incubare a 37 ℃ per 30 min.
6) Ripetere il passaggio 3 (lavaggio).
7) Aggiungere 100 ul di substrato in ciascun pozzetto, miscelare correttamente, incubare per 10 minuti a 37 ℃ al buio con una nuova pellicola adesiva.
8) Aggiungere 50μL di soluzione di arresto in ciascun pozzetto, miscelare delicatamente e determinare il risultato.
9) Misurare il valore OD di ogni pozzetto con un fotometro a doppia lunghezza d'onda 450nm/630nm.

 

8. Risultati

Affinché il test sia valido, il valore medio di OD dei pozzetti di controllo positivo deve essere maggiore o uguale a 0,6 e il valore medio di OD dei pozzetti di controllo negativo è inferiore a 0,1.Altrimenti il ​​test non è valido, è necessario ripetere il test.
Il risultato è giudicato dal valore S/P,
S/P=(Campione OD450/630- NCx(—))/( PCx(—)- NCx(—)), NCx(—) indica il valore medio di OD450/630 del controllo negativo, PCx(—) indica il valore medio di OD450 del controllo positivo /630 valore
Se S/P≥0.2, è positivo;inferiore a 0,2, è negativo.

 

9. Interpretazione del risultato

1. Grave emolisi, la proteina della fibra nella separazione del siero non è sufficiente, contenente eritrociti, un precipitato, un campione con batteri può portare a falsi positivi.
2. Risultati negativi possono verificarsi su singoli suini dopo i vaccini a causa delle differenze individuali o della durata immunitaria.
3. Risultati positivi per la diagnosi sierologica e l'indagine epidemiologica dei suini da combinare con altri metodi e dati clinici.

 

10. Prestazioni del prodotto

1. Specificità: utilizzare questo kit per rilevare il siero di riferimento, il tasso di conformità raggiunge il 100%.
2. Sensibilità: può raggiungere un massimo di 1:5120.
3. Precisione: CV (%) non superiore all'8%.
4. Stabilità: Conservare a 2 ℃ ~ 8 ℃ per 12 mesi o conservare a 37 ℃ per 3 giorni, il risultato può raggiungere i 3 standard precedenti.

 

11. Precauzioni e avvertenze per gli utenti

1. Questo kit di test è solo per uso di ricerca.n.
2. Non utilizzare reagenti scaduti, non mescolare reagenti di lotti diversi.
3. Leggere attentamente il manuale prima dell'uso.
4. I rifiuti dell'esperimento devono essere trattati con sterilizzazione a vapore ad alta pressione a 121 ℃ per 30 minuti o trattati con 5,0 g/L di disinfettante di ipoclorito di sodio per 30 minuti, quindi scartati.
5. La piastra MicroWell rimossa dall'ambiente refrigerato deve essere bilanciata dall'umidità per asciugare a temperatura ambiente, quindi può essere aperta.Riporre la piastra MicroWell inutilizzata nella busta di alluminio asciutta e sigillarla a 4 ℃.Il reagente liquido non utilizzato deve coprire i tappi, conservare a 2-8 ℃ al buio con altri componenti del gruppo.
6. Se il tampone di lavaggio concentrato 20× appare cristallino, è normale, metterlo a 37℃ finché non si scioglie.
7. Dovrebbe usare Micropipetta per aggiungere campione e reagenti e spesso provarne l'accuratezza.
8. Quando si aggiunge il tampone di lavaggio, deve essere pieno ma non traboccante, evitare la comparsa di enzimi liberi all'imboccatura del pozzo o l'inquinamento incrociato tra i pozzetti.
9. La soluzione di arresto è corrosiva, utilizzare una grande quantità di acqua per lavarsi immediatamente quando si tocca la pelle oi vestiti.

 

Specifiche: 96 pozzetti × 2.
Data di scadenza: 12 mesi.
Conservazione: conservare a 2 ~ 8 ℃, al buio.
Data di produzione: sull'imballaggio esterno del kit di test.

 

 

Epidemiologia del virus della pseudorabbia suina

Il virus della pseudorabbia è ampiamente distribuito nel mondo.La pseudorabbia si trova naturalmente in maiali, bovini, pecore, cani e gatti.Inoltre, sono sensibili anche una varietà di animali selvatici e carnivori.Il visone e il furetto possono anche causare focolai di pseudorabbia alimentando frattaglie di maiale contenenti virus della pseudorabbia.Tra gli animali da esperimento, i conigli sono i più sensibili e possono essere infettati anche topi, ratti e porcellini d'India.Esistono pochi rapporti sull'infezione umana da virus della pseudorabbia e nessuno di essi si basa sull'isolamento del virus.
I suini sono l'ospite di deposito del virus della pseudorabbia e suini malati, suini infetti e topi infetti sono importanti fonti di infezione della malattia.Molti studiosi ritengono che l'infezione di altri animali sia correlata al contatto con maiali e topi.
Negli allevamenti di suini, il virus della pseudorabbia viene trasmesso principalmente ai suini sani attraverso l'eliminazione dei suini infetti.Inoltre, il personale e le attrezzature contaminati dal virus della pseudorabbia svolgono un ruolo importante nella trasmissione.La trasmissione aerea è la via principale di diffusione del virus della pseudorabbia, ma non è chiaro fino a che punto possa diffondersi.Si è anche scoperto che anche i bovini che pascolano intorno agli allevamenti di suini dove si trova la pseudorabbia nelle vicinanze possono ammalarsi.In questo caso, la trasmissione dell'aria è l'unico modo possibile.Nei suini, il virus si trasmette principalmente attraverso le secrezioni nasali.Inoltre, anche il latte e lo sperma sono possibili vie di trasmissione.
Dopo essere stati infettati dal virus della pseudorabbia, tutti gli animali tranne i maiali sono morti.
La pseudorabbia si verifica stagionalmente, soprattutto nelle stagioni fredde, ma anche in altre stagioni.

 

 

 

 

 

 

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