La prova Kit ELISA Aflatoxin Testing Equipment For dell'arachide del T2 dei tricoteceni alimenta il riso 3ppb

Il corredo del test ELISA dei tricoteceni (T2) per il riso 96 dell'arachide dell'alimentazione scaturisce/corredo

 

1. Principio

Questo corredo della prova è basato sull'immunotest enzimatico competitivo per la rilevazione dei tricoteceni (T2). L'antigene di coppia è ricoperto prima sulle bande micro--bene. I tricoteceni (T2) nel campione e negli antigeni di coppia ricoperti prima sulle bande micro--bene competono per gli anticorpi anti- dei tricoteceni (T2). Dopo che l'aggiunta del coniugato degli enzimi, il substrato di TMB si aggiunge per colorazione. Il valore di densità ottica (OD) del campione ha una correlazione negativa con i tricoteceni (T2) nel campione. Questo valore è confrontato alla curva standard ed i residui dei tricoteceni (T2) successivamente è ottenuto.

 

2. Caratteristiche tecniche

Sensibilità: 0,05 ppb
Temperatura dell'incubatrice: 25℃
Tempo dell'incubatrice: 30min~15min
Limite di segnalazione:
Alimentazione, arachide, riso 3ppb
Tasso di reazione crociata:
Tricoteceni (T2) 100%
Tasso di recupero:
Alimentazione, riso 90±25%
Arachide 85±25%

 

3. Componenti

 

1	Strisce micro--bene	12 strisce con 8 pozzi smontabili ciascuno
2	6× soluzione tipo (1 ml ciascuno)	0ppb	0.05ppb
		0.15ppb	0.45ppb
		1.35ppb	4.05ppb
3	Coniugato degli enzimi	7ml	spiritello malevolo
4	Soluzione di lavoro dell'anticorpo	7ml	cappuccio blu
5	Substrato A	7ml	cappuccio bianco
6	SubstrateB	7ml	berretto nero
7	Fermi la soluzione	7ml	cappuccio giallo
8	20× ha concentrato lavare l'amplificatore	15ml	cappuccio bianco
9	5× ha concentrato la ridissoluzione della soluzione	50ml*2	cappuccio trasparente

 

4. Materiali richiesti ma non forniti

1) Attrezzatura: ELISA Reader (450 nm/630nm), omogeneizzatore, agitatore, centrifuga, equilibrio: 0.01g quantità sensibile, dispositivo dell'azoto-essiccazione, incubatrice, pipette graduate, stampante
2) micropipette: 20ml ad un solo canale ~ 200ml, 100ml ~ 1000ml, μl multicanale 30~300
3) reagenti: Metanolo.

5. Pretrattamento del campione

Istruzioni (i seguenti punti devono occuparsi prima del pretrattamento)
1) soltanto le punte eliminabili possono essere usate per gli esperimenti e le punte devono essere cambiate una volta usate per l'assorbimento dei reagenti differenti;
2) prima dell'esperimento, ogni utensile sperimentale deve essere pulito e dovrebbe ri-essere pulito se necessario, per evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.

Preparazione della soluzione prima di pretrattamento del campione:
1) soluzione di Sampleredissolving
Usi 1 parte (5X) del concentrato di ridissolvendo la soluzione e dissolversi con 4 parti dell'acqua deionizzata per ottenere il campione pronto per l'uso che ridissolve la soluzione.
2) soluzione dell'estratto- campione
Usi 1 parte di metanolo e dissolva con 1 parte del campione che ridissolve la soluzione per ottenere la soluzione pronta per l'uso dell'estratto- campione.
Preparazione di alimentazione, arachide, campione del riso

1) La presa 1.0±0.05g grinded il campione nel tubo centrifugo 50ml, aggiunge la soluzione dell'estratto- campione 5ml, scossa per 3min, centrifuga sopra a 4000r/min a 20℃ per il min 10;
2) il surnatante della presa 100ul (su-strato), aggiunge il campione 400ul che ridissolve la soluzione, scuote ad uniformemente;
3) prende 50μl per provare
Fattore di diluizione: 25

 

6. Procedure di ELISA

6,1 istruzioni

1) porta i reagenti di ELISA alla temperatura ambiente (20 - °C) 25 prima dell'uso.
2) reagenti messi di ELISA di nuovo a ℃ 2-8 subito dopo di uso
3) la riproducibilità di ELISA nel processo dell'analisi è in gran parte dipende dalla consistenza del piatto lavante, l'operazione lavante corretta del piatto è il punto del programma di ELISA della determinazione
4) in tutto il processo di incubazione della temperatura costante, eviti l'esposizione alla luce, guarnizione il microplate con la membrana della copertura.

6. 2 procedure di operazione

1) porta il corredo della prova alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per almeno il min 30, nota che ogni reagente deve essere scosso uniformemente prima dell'uso;
2) ha messo le strisce micro--bene richieste nelle strutture del piatto. Ha risigillato il microplate inutilizzato, memorizzato a ℃ 2-8, non congelato.
3) preparazione della soluzione: prenda l'amplificatore di lavaggio concentrato 20× 15ml, dissolva con acqua deionizzata al 1:19 (amplificatore di lavaggio concentrato 20× di 1 parte + 19 parti di acqua deionizzata), o prepari come quantità stata necessaria.
4) numerazione: numero i micro-pozzi secondo i campioni e la soluzione tipo; ogni campione e soluzione tipo dovrebbero essere eseguiti due volte; registri le loro posizioni.
5) aggiunge la norma/campione: Aggiunga il µL 50 del campione o la soluzione tipo nei pozzi duplicati separati, quindi aggiunga il coniugato degli enzimi, 50 µL/well; poi soluzione di lavoro dell'anticorpo, 50 µL/well. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente, guarnizione il microplate con la membrana della copertura, incubi il °C at25 per il min 30 nello scuro.
6) microplate del lavaggio: Apra con attenzione il membrance della copertura, versano il liquido da microwell; aggiunga 250 µL/well dell'amplificatore di lavaggio, lavi completamente per 4-5 volte, 15-30 s ogni volta, quindi elimini ed agiti per asciugarsi con carta assorbente. (Utilizzi la lancia inutilizzata per perforare la bolla dopo asciutto)
7) colorazione: aggiunga il µL 50 della soluzione del substrato A poi una soluzione di 50 µL B in ogni pozzo. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente, °C del andincubate at25 per 15minin il buio per colorazione.
8) determinazione: aggiunga 50 che il µL del ferma la soluzione in ogni pozzo. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente. Fissi la lunghezza d'onda del lettore del microplate a 450 nanometro per determinare il valore del OD di ogni pozzo. (Raccomandi di leggere il valore del OD alla doppio-lunghezza d'onda 450/630 di nanometro nel min 5).

 

7. Giudizio di risultato

Ci sono due metodi per giudicare i risultati; quello primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa. Nota che il valore del OD del campione ha una correlazione negativa con i tricoteceni (T2) nel campione
7,1 determinazione qualitativa
La gamma di concentrazione (ppb) può essere ottenuta tramite rispetto il valore medio di capacità di assorbimento alle norme. Supponga che il valore di capacità di assorbimento del campione uno sia 0,3, il campione due è 1,0 e le norme sono: 0ppb di 2,243; 0.05ppb di 1,816; 0.15ppb di 1,415; 0.45ppb di 0,74; 1.35ppb di 0,313; 4.05ppb di 0,155. Poi la concentrazione del campione uno è nell'ordine di 1.35ppb ~ 4.05ppb; Il campione due è 0.15ppb ~ 0.45ppb. La gamma di concentrazione di tricoteceni (T2) nei campioni può essere ottenuta dal moltiplicato da per la diluizione corrispondente del campione.
7. analisi quantitativa 2
Per calcolare la concentrazione di campioni, una curva standard dovrebbe essere fatta. Prima che la curva standard sia fatta, il concetto di % di capacità di assorbimento dovrebbe essere di sapere.
Calcolo di % di capacità di assorbimento:

 

Percentuale di valore di capacità di assorbimento =	B	×100%
	B0

 

Valore del OD di media di B-the del campione o della soluzione tipo
Valore del OD di media di B0-the delle 0 soluzioni tipo di ng/ml
La norma zero così è resa uguale a 100% ed i valori di capacità di assorbimento sono citati nelle percentuali. I valori hanno calcolato per le norme sono inseriti in un sistema delle coordinate su carta millimetrata semilogarithmic contro la concentrazione nei tricoteceni (T2) [ng/ml]. La concentrazione nei tricoteceni (T2) in ng/ml che corrisponde alla capacità di assorbimento di ogni campione può essere letta dalla curva di calibratura.
Un software speciale per l'analisi di risultato dell'ELISA faciliterà le doppie o determinazioni multiple. Se avete bisogno di, chiami prego per richiedere.

 

8. Precauzioni
1) la temperatura ambiente inferiore a ℃ 25 o la temperatura dei reagenti e dei campioni che non sono rinviati alla temperatura ambiente (℃ 20-25) condurrà ad un valore standard più basso del OD.
2) la siccità del microplate nel processo di lavaggio sarà accompagnata dalle situazioni compreso le curve standard non lineari e la riproducibilità indesiderabile; Così continui al punto seguente subito dopo del lavaggio.
3) miscela anche prima dell'aggiunta dei qualsiasi reagenti.
4) la soluzione di arresto è la soluzione acida solforica da 2 m., evita contattare con la pelle.
5) non usa il corredo che supera la sua data di scadenza. L'uso dei reagenti diluiti o adulterati dai corredi condurrà ai cambiamenti nella sensibilità e nei valori di rilevazione del OD. Non scambi i reagenti dai corredi dei numeri di lotto differenti per usare.
6) stoccaggio: deposito a ℃ 2-8, non congelato. Metta il microplate inutilizzato in una borsa di automatico-sigillamento per risigillarlo. La sostanza tipo ed il colore incolore precedenti è sensibili alla luce e non possono direttamente essere esposte così alla luce.
7) scarta la soluzione di colorazione con tutto il colore che indica la degenerazione di questa soluzione. Il valore di rilevazione (450/630nm) delle 0 soluzioni tipo (0 ppb) di meno di 0,5 ((A450nm<0> 8) la temperatura ottimale della reazione è 25℃ e troppo alto o ugualmente le basse temperature provocheranno i cambiamenti nella sensibilità di rilevazione e nei valori del OD.

 

9. Data di scadenza e di stoccaggio
Stoccaggio: deposito a ℃ 2-8, non congelato.
Data di scadenza: 12 mesi; la data di produzione è sulla scatola.
Nota: Se l'imballaggio sotto vuoto di microplate ha perdita, è ancora valido usare, non colpisce il risultato dei test, è di rilassarsi per usare.

 

 

 

 

 

 

 

 

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