Anticorpo del nitrofurano AHD ELISA Food Rapid Test Kit per la sensibilità 0.04ppb 96Wells/Kit del latte

Nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit per la sensibilità 0.04ppb 96Wells/Kit del latte

 

1. Principio del nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Questo corredo della prova è basato sull'immunotest enzimatico competitivo per la rilevazione di Aminohydantion (AHD) nel campione. Gli antigeni di coppia sono ricoperti prima sulle bande micro--bene. Il Aminohydantion (AHD) nel campione e gli antigeni di coppia ricoperti prima sulle bande micro--bene competono per gli anticorpi anti--AHD. Dopo che l'aggiunta del coniugato degli enzimi, il substrato di TMB si aggiunge per colorazione. Il valore di densità ottica (OD) del campione ha una correlazione negativa con il AHD in. Questo valore è confrontato alla curva standard e la concentrazione di AHD successivamente è ottenuta.

 

2. Caratteristiche tecniche del nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Sensibilità: 0.04ppb

Temperatura di incubazione: 25℃

Tempo di incubazione: 30min~15min

Tessuto di limite di segnalazione, uovo, miele: 0.1ppb

Tasso di reazione crociata

AHD 100%

AMOZ < 0="">

AOZ < 0="">

SEM < 0="">

Tasso di recupero

Tessuto, uovo 95±25%

Miele 75±25%

 

3. Componenti

 

1	Strisce micro--bene	12 strisce con 8 smontabili pozzi ciascuno
2	6× soluzione tipo (1 ml ciascuno)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	Coniugato degli enzimi	7ml	spiritello malevolo
4	Soluzione di lavoro dell'anticorpo	7ml	cappuccio blu
5	Substrato A	7ml	cappuccio bianco
6	SubstrateB	7ml	berretto nero
7	Fermi la soluzione	7ml	cappuccio giallo
8	20× ha concentrato lavare l'amplificatore	40ml	cappuccio bianco
9	2× ha concentrato la ridissoluzione della soluzione	50ml	cappuccio trasparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	berretto nero

 

4. Materiali richiesti ma non forniti

 

1) Attrezzature: il lettore del microplate, lo stampatore, l'omogeneizzatore, il dispositivo dell'azoto-essiccazione, il vortice, centrifuga, misurante pipetta, equilibrio (una sensibilità reciproca di 0,01 g), incubatrice, bagno d'acqua;

2) Micropipettors: 20-200µL ad un solo canale, 100-1000µL e 30~300µl multicanale;

3) Reagenti: NaOH, acetato di etile, n-esano, HCI (36,5% approssimativi), K2HPO4·3H2O

 

5. Pretrattamento del campione

 

Istruzioni

I seguenti punti devono occuparsi prima del pretrattamento affatto del genere di campione:

1) Soltanto le punte eliminabili possono essere usate per gli esperimenti e le punte devono essere cambiate una volta usate per l'assorbimento dei reagenti differenti;

2) Prima dell'esperimento, ogni attrezzatura sperimentale deve essere pulita e dovrebbe ri-essere pulita se necessario, per evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.

Preparazione della soluzione prima di pretrattamento del campione:

) le 0,1 m. K2HPO4: dissolva 11.4g K2HPO4·3H2O in acqua deionizzata a 500mL.

b) 1 m. HCl: dissolva 8.6mL HCI (36,5% approssimativi) in acqua deionizzata a 100mL.

c) un NaOH da 1 m.: dissolva il NaOH 4g in acqua deionizzata a 100mL.

la d) il 2×concentrated che ridissolve la soluzione è diluita con acqua deionizzata al 1:1 (1mL ha concentrato la ridissoluzione della soluzione + 1 ml di acqua deionizzata), usato per la ridissoluzione del campione.

 

5,1 preparazione dei campioni

a) Tessuto, uovo

1) Pesi 1± 0.05g del campione omogeneizzato, aggiunga 4mL dell'acqua distillata, 0.5mL 1 la m. HCI e 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ad ogni tubo, scuotono correttamente per 2min;.

2) Incubi il ℃ at37 durante la notte (ore approx16) o incubi at56℃ da bagno d'acqua (2 ore).

3) Aggiunga l'acetato di etile 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH di 0.4mL 1M e 6mL ad ogni tubo, scossa per 30s.

4) Centrifuga a 4000r/min di cui sopra alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per 10min (se c'è emulsionificazione o strato dell'acetato di etile non è abbastanza per 3ml, non incubano campione a bagno d'acqua 80℃ per 10min e la centrifuga ripetutamente; o aumenti la velocità ed estenda il periodo della centrifuga).

5) Trasferimento 3mL dello strato dell'acetato di etile in un nuovo tubo centrifugo ed evaporare allo stato secco da azoto o da aria a 50℃.

6) Dissolva i residui asciutti in n-esano 2mL, aggiunga 1mL della soluzione di ridissoluzione diluita, miscela correttamente per 30 secondi, centrifuga superiore a 4000 r/min alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per il min 10; Rimuova la fase del n-esano di su-strato (se c'è emulsionificazione, dopo l'eliminazione della fase del n-esano di su-strato, incubano campione a bagno d'acqua 70℃ per 10-20min, centrifugano ripetutamente).

7) Prenda a 50 il µL del più basso per l'analisi.

Popolare di diluizione del campione: 2

b) Miele

1) Pesi 2± 0.05g del campione omogeneizzato (miele), aggiunga 4mL dell'acqua distillata, 0.5mL 1 la m. HCI e 100 il µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ad ogni tubo, scuote correttamente per 2min;.

2) Incubi il ℃ at37 durante la notte (ore approx16) o incubi at56℃ da bagno d'acqua (2 ore).

3) Aggiunga l'acetato di etile 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH di 0.4mL 1M e 6mL ad ogni tubo, scossa per 30s.

4) Centrifuga a 4000r/min di cui sopra alla temperatura ambiente (20-25℃) per 10min (se c'è emulsionificazione o strato dell'acetato di etile non è abbastanza per 3ml, non incubano campione a bagno d'acqua 80℃ per 10min e la centrifuga ripetutamente; o aumenti la velocità ed estenda il periodo della centrifuga).

5) Trasferimento 3mL dello strato dell'acetato di etile in un nuovo tubo centrifugo ed evaporare allo stato secco da azoto o da aria a ℃ 50.

6) Dissolva i residui asciutti in n-esano 2mL, aggiunga 1mL della soluzione di ridissoluzione diluita, miscela correttamente per 30 secondi, centrifuga sopra a 4000r/min alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per il min 10; Rimuova la fase del n-esano di su-strato (se c'è emulsionificazione, dopo l'eliminazione della fase del n-esano di su-strato, incubano campione a bagno d'acqua 70℃ per 10-20min, centrifugano ripetutamente).

7) Prenda a 50 il µL del più basso per l'analisi.

Popolare di diluizione del campione: 1

 

6. Procedure di ELISA

 

6,1 istruzioni

1) Porti tutti i reagenti e strisce micro--bene alla temperatura ambiente (℃ 20-25) prima dell'uso;

2) Restituisca tutti i reagenti a ℃ 2-8 subito dopo di uso;

3) La riproducibilità dell'analisi di ELISA, in larga misura, dipende dalla consistenza del lavaggio del piatto. L'operazione corretta di lavare del piatto è il punto chiave in ELISA le procedure;

4) Per l'incubazione alle temperature costanti, tutti i campioni e reagenti devono evitare l'esposizione alla luce ed ogni microplate dovrebbe essere sigillato dalla membrana della copertura.

 

6,2 procedure di operazione

1) Porti il corredo della prova alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per almeno 30min, noti che ogni reagente deve essere scosso per mescolarsi uniformemente prima dell'uso, metta le strisce micro--bene richieste nelle strutture del piatto. Ha risigillato il microplate inutilizzato, deposito a ℃ 2-8, non congelato.

2) Preparazione della soluzione: 40mL diluito del × 20 concentrato lavando amplificatore con acqua deionizzata al 1:19 (un × di 1 parte 20 concentrato lavando amplificatore + 19 parti di acqua deionizzata). O prepari come stato necessario.

3) Numerazione: numero i micro-pozzi secondo i campioni e la soluzione tipo; ogni campione e soluzione tipo dovrebbero essere eseguiti due volte, registrano le loro posizioni.

4) Aggiunga 50µL del campione o della soluzione tipo nei pozzi duplicati separati; aggiunga delicatamente il coniugato poi 50µL della soluzione di lavoro dell'anticorpo in ogni pozzo, miscela degli enzimi 50ul scuotendo il piatto manualmente. Sigilli il microplate con la membrana della copertura, andincubate a ℃ 25 per 30min.

5) Versi il liquido da microwell, falda per asciugarsi su carta assorbente, aggiunga 250µL/well di lavare l'amplificatore per lavare il microplate per i 15-30s, poi elimini ed agiti per asciugarsi con carta assorbente, ripeti 4-5 volte. (Se ci sono le bolle dopo lo sbattimento, le hanno tagliate con le punte pulite).

6) Colorazione: aggiunga 50µL del substrato A e poi 50µL del substrato B in ogni pozzo. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente, quindi incubi a ℃ 25 per il min 15 a buio per colorazione.

7) Determinazione: aggiunga 50µL del fermano la soluzione in ogni pozzo. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente. Fissi la lunghezza d'onda del lettore del microplate a 450nm per determinare il valore del OD di ogni pozzo. (Raccomandi di leggere il valore del OD alla doppio-lunghezza d'onda 450/630nm in 5 minuti).

 

7. Giudizio di risultato

 

Ci sono due metodi per giudicare i risultati: quello primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa. Nota che il valore del OD del campione ha una correlazione negativa con il contenuto di AHD.

7,1 determinazione qualitativa

La gamma di concentrazione (ng/ml) può essere ottenuta dal paragonare il valore medio del OD del campione a quello della soluzione tipo. Presupporre che il valore del OD del campioneⅠ sia 0,3 e quello del Ⅱ del campione è 1.0ppb, il valore del OD delle soluzioni tipo è: 2,243 per 0ppb, 1,816 per 0.04ppb, 1,415 per 0.12ppb, 0,74 per 0.36ppb, 0,313 per 1.08ppb, 0,155 per 3.24ppb, la gamma di concentrazione del Ⅰ del campione sono di conseguenza 1,08 a 3.24ppb e quello del Ⅱ del campione è 0,12 a 0.36ppb.

7,2 determinazione quantitativa

I valori medi dei valori di capacità di assorbimento è ottenuto per il valore medio del OD (B) del campione e della soluzione tipo divisi dal valore del OD (B0) della prima soluzione tipo (0 standard) e successivamente moltiplicati per 100%, cioè,

Percentuale di valore di capacità di assorbimento =	B	×100%
	B0

Valore del OD di media di B-the (doppi pozzi) del campione o della soluzione tipo

Valore del OD di media di B0-the della soluzione tipo 0ng/mL

Disegni la curva standard con le percentuali di assorbimento della soluzione tipo ed i valori del semilogarithm della soluzione tipo di AHD (ng/ml) come y e ascissa, rispettivamente. Legga la concentrazione corrispondente del campione dalla curva standard comprendendo la sua percentuale di assorbimento nella curva standard. Il valore risultante successivamente è moltiplicato per il popolare corrispondente di diluizione, infine ottenente la concentrazione di AHD nel campione.

 

8. Precauzioni

 

1) La temperatura ambiente è più bassa di 25℃ o la temperatura ed il campione del reagente non sono restituiti alla temperatura ambiente (20-25℃), che indurrà il valore standard del OD a diminuire.

2) Durante il processo di lavaggio, l'essiccazione del microplate sarà accompagnata dalla non linearità della curva standard e della riproducibilità insoddisfacente; quindi, procedi al punto seguente subito dopo del lavaggio.

3) Mescoli bene, altrimenti ci sarà la riproducibilità difficile.

4) Fermi la soluzione è una soluzione acida solforica da 2 m., evitano il contatto con pelle.

5) Non usi il corredo oltre la data di scadenza. L'uso dei reagenti diluiti o adulterati dal corredo può provocare i cambiamenti nei valori del OD di rilevazione e della sensibilità. Non sostituisca i reagenti nelle serie differenti di corredi.

6) Risigilli i microplates inutilizzati in borse autosigillanti. Le soluzioni tipo e gli accoppiatori incolori sono sensibili alla luce e non possono direttamente essere esposti per accendersi.

7) Scarti tutta la soluzione di tintura di cui il colore indica che la soluzione si è degradata. Un valore di rilevazione di meno di 0,5 per soluzione tipo 1 (0 ppb) indica la degradazione.

8) La temperatura ottimale della reazione è 25℃ e la sensibilità di rilevazione ed il valore del OD cambieranno se la temperatura è troppo alta o troppo bassa.

 

9. Data di scadenza e di stoccaggio

 

Stoccaggio: deposito a ℃ 2 - 8, non congelato.

Data di scadenza: 12 mesi; la data di produzione è sulla scatola.

Nota: Se l'imballaggio sotto vuoto di microplate ha perdita, è ancora valido usare, non colpisce il risultato dei test, è di rilassarsi per usare.

 

 

Q1: Quando sarà spedito?
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