Latte rapido 96Wells/Kit ISO9001 di rilevazione di ELISA Milk Test Kit For della melammina

Kit test ELISA melamina per latte di rilevamento 96 pozzetti/Kit ISO9001

 

1. Principio

Questo kit di test si basa sul test immunoenzimatico competitivo indiretto per la rilevazione della melamina nel campione.L'antigene di accoppiamento è pre-rivestito sulle strisce dei micropozzetti.La melammina nel campione e gli antigeni di accoppiamento pre-rivestiti sulle strisce dei micropozzetti competono per gli anticorpi anti-melamina.Dopo l'aggiunta del coniugato enzimatico, viene aggiunto il substrato TMB per la colorazione.Il valore della densità ottica (OD) del campione di prova ha una correlazione negativa con la concentrazione di melamina nel campione.Questo valore viene confrontato con la curva standard e successivamente si ottiene la concentrazione di melamina.

 

 

2.Kit per il test del latteComponenti

1	Strisce di micropozzetti	12 strisce di cui 8 rimovibili pozzi ciascuno
2	6× soluzione standard (1 mL ciascuna)	0ppb	0,5 ppm
		1,5ppb	4,5ppb
		13,5 ppm	40,5 ppm
3	Spiking soluzione standard	1 ppm	1 ml
4	Coniugato enzimatico	7ml	tappo rosso
5	Soluzione di lavoro anticorpale	7ml	berretto blu
6	Substrato A	7 ml	cappello bianco
7	Substrato B	7 ml	berretto nero
8	Fermare la soluzione	7 ml	tappo giallo
9	Estrazione del campione 10x Una soluzione	50 ml	tappo trasparente
10	Soluzione B di estrazione del campione 20x	50 ml	berretto blu
11	Tampone di lavaggio concentrato 20×	15 ml	cappello bianco

 

3. Specifiche tecniche

Sensibilità: 0,5 ppb

Temperatura dell'incubatore: 25 ℃

Tempo di incubazione: 30min～15min

Limite di rilevamento:

Burro, caramelle, formaggio 10ppb

Tasso di reazione incrociata:

Melamina 100%

Tasso di recupero:

Burro 90±25%

Caramelle, formaggio 95±25%

 

4. Materiali richiesti ma non forniti

1) Attrezzature: lettore di micropiastre, stampante, vortice, centrifuga, pipette di misurazione, bilancia (una sensibilità reciproca di 0,01 g), bagno d'acqua di 70 ℃;

2) Micropipettatrici: monocanale 20~200 µL, 100~1000 µL;e multicanale 30~300 μl;

 

5. Pretrattamento del campione

Istruzioni (I seguenti punti devono essere trattati prima del pretrattamento)

1) Per gli esperimenti possono essere utilizzati solo i puntali monouso e i puntali devono essere cambiati se utilizzati per reagenti diversi;

2) Prima dell'esperimento, ogni attrezzatura sperimentale deve essere pulita e dovrebbe essere ripulita se necessario, al fine di evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.

Preparazione della soluzione

1) Estrazione del campione Una soluzione

Diluire 10 volte l'estrazione del campione Una soluzione con acqua deionizzata a 1:9;

2) Soluzione di estrazione del campione B

Diluire la soluzione B di estrazione del campione 20x con acqua deionizzata a 1:19.

 

5.1 Burro

1) Prendere 1 g di burro fresco in una provetta da centrifuga da 50 ml, aggiungere 5 ml di soluzione di estrazione del campione A, incubare a bagnomaria a 70°C per 5 minuti, vortexare e agitare per 5 minuti, centrifugare a oltre 4000 giri/min a temperatura ambiente per 5 minuti;

2) Prendere 50ul di liquido per lo strato inferiore per l'analisi

Piega di diluizione del campione: 5

5.2 Caramelle, formaggio

1) Prelevare 1 g di campione fresco in una provetta da centrifuga da 50 ml, aggiungere 5 ml di soluzione B per l'estrazione del campione, incubare a bagnomaria a 70°C per 5 minuti, vortexare e agitare per 5 minuti, centrifugare a oltre 4000 giri/min a temperatura ambiente per 5 minuti;

2) Prendere 50ul di liquido per lo strato inferiore per l'analisi

Piega di diluizione del campione: 5

 

6. Procedure ELISA

6.1 Istruzioni

1 Portare tutti i reagenti e le microstrisce a temperatura ambiente (20-25 ℃).

2 Riportare tutti i reagenti a 2-8 ℃ immediatamente dopo l'uso.

3 La riproducibilità dell'analisi ELISA, in larga misura, dipende dalla consistenza del lavaggio delle lastre.Il corretto funzionamento del lavaggio delle lastre è il punto chiave nelle procedure di ELISA.

4 Per l'incubazione a temperatura costante, tutti i campioni ei reagenti devono evitare l'esposizione alla luce e ogni micropiastra deve essere sigillata dalla membrana di copertura.

6.2 Procedure operative

1)Portare il kit di test a temperatura ambiente (20-25 ℃) per almeno 30 minuti, notare che ogni reagente deve essere agitato uniformemente prima dell'uso;inserire le strisce di micro-pozzetti richieste nei telai delle piastre.Risigillare la micropiastra inutilizzata, conservata a 2-8 ℃, non congelata.

2)Preparazione della soluzione: diluire 15 ml del tampone di lavaggio concentrato 20X con l'acqua deionizzata a 300 ml per l'uso;

3)Numerazione: numerare i micropozzetti in base ai campioni e alla soluzione standard;ogni campione e soluzione standard deve essere eseguito in duplicato;registrare le loro posizioni.

4)Aggiungere 50 µL di campione/soluzione standard per separare i pozzetti duplicati, quindi aggiungere 50 µL di coniugato enzimatico, quindi aggiungere 50 µL di soluzione di lavoro dell'anticorpo a ciascun pozzetto, agitare correttamente, sigillare la micropiastra con la membrana di copertura e incubare a 25 ℃ per 30 min;

5)Eliminare il liquido dai pozzetti, lavare la micropiastra con il tampone di lavaggio diluito a 250 µL/pozzetto per 5-6 volte.Ogni volta bagnare la pozzetto con il tampone di lavaggio diluito per 15-30 secondi e poi sbattere ad asciugare su carta assorbente (se ci sono le bolle dopo lo sbattimento tagliarle con le punte pulite).

6)Colorazione: aggiungere 50 µL del substrato A, quindi 50 µL del substrato B in ciascun pozzetto.Mescolare delicatamente agitando manualmente la piastra e incubare a 25 ℃ per 15 minuti al buio per la colorazione;

7)Determinazione: aggiungere 50 µL della soluzione di arresto in ciascun pozzetto.Mescolare delicatamente agitando manualmente la piastra.Impostare la lunghezza d'onda del lettore di micropiastre a 450 nm per determinare il valore OD di ogni pozzetto.(Si consiglia di leggere il valore OD alla doppia lunghezza d'onda 450/630nm entro 5 min).

 

7. Giudizio sul risultato

Esistono due metodi per giudicare i risultati;il primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa.Si noti che il valore OD del campione ha una correlazione negativa con il contenuto di melamina.

7.1 Determinazione qualitativa

L'intervallo di concentrazione (ng/mL) può essere ottenuto confrontando il valore medio di OD del campione in esame con quello della soluzione standard.Supponendo che il valore OD del campioneⅠ sia 0,3 e quello del campioneⅡ sia 1,0, il valore OD delle soluzioni standard è: 2,043 per 0 ppb, 1,604 per 0,5 ppb, 1,101 per 1,5 ppb, 0,512 per 4,5 ppb, 0,161 per 13,5 ppb , 0,055 per 40,5 ppb, di conseguenza l'intervallo di concentrazione del campioneⅠ va da 4,5 a 13,5 ppb e quello del campione Ⅱ va da 1,5 a 4,5 ppb.

7.2 Determinazione quantitativa

I valori medi dei valori di assorbanza equivalgono alla percentuale del valore OD medio (B) del campione in esame e della soluzione standard diviso per il valore OD (B0) della prima soluzione standard (0 standard) e successivamente moltiplicato per 100 %, questo è

 

Percentuale del valore di assorbanza =	B	×100%
	B0

 

B: il valore OD medio (doppio pozzetto) del campione di analisi o della soluzione standard

B0: il valore OD medio della soluzione standard 0ng/mL

Disegnare la curva standard con le percentuali di assorbimento delle soluzioni standard e i valori semilogaritmici delle soluzioni standard di melamina (ng/mL) come asse Y e X, rispettivamente.Leggere la concentrazione corrispondente del campione di prova dalla curva standard incorporando la sua percentuale di assorbimento nella curva standard.Il valore risultante viene successivamente moltiplicato per la corrispondente piega di diluizione, ottenendo infine la concentrazione di Melamina nel campione.

 

8. Precauzioni

1)La temperatura ambiente inferiore a 25 ℃ o la temperatura dei reagenti e dei campioni di test non riportati alla temperatura ambiente (20-25 ℃) porteranno a un valore OD standard inferiore.

2)La secchezza della micropiastra nel processo di lavaggio sarà accompagnata da situazioni che includono curve standard non lineari e riproducibilità indesiderabile;Quindi continua con il passaggio successivo subito dopo il lavaggio.

3)Mescolare uniformemente, altrimenti ci sarà la riproducibilità indesiderabile.

4)La soluzione di arresto è la soluzione di acido solforico 2 M, evitare il contatto con la pelle.

5)Non utilizzare il kit oltre la data di scadenza.L'uso di reagenti diluiti o adulterati dai kit porterà a cambiamenti nella sensibilità e nei valori di OD rilevabili.Non scambiare i reagenti dei kit con numeri di lotto diversi da utilizzare.

6)Mettere la micropiastra inutilizzata in un sacchetto autosigillante per richiuderla.La sostanza standard e il formatore di colore incolore sono fotosensibili e quindi non possono essere esposti direttamente alla luce.

7)Scartare la soluzione colorante con qualsiasi colore che indichi la degenerazione di questa soluzione.Il valore di rilevamento della soluzione standard 1 (0 ppb) inferiore a 0,5 indica la sua degenerazione.

8)La temperatura di reazione ottimale è di 25 ℃ e temperature troppo alte o basse comporteranno cambiamenti nella sensibilità di rilevamento e nei valori OD.

 

9. Data di conservazione e scadenza

Conservazione: conservato a 2-8 ℃, non congelato.

Data di scadenza: 12 mesi;la data di produzione è sulla scatola

Nota: se la confezione sottovuoto della micropiastra presenta perdite, è ancora valida per l'uso, non influisce sul risultato del test, rilassati per l'uso.

 

 

Q1: quanto tempo ci vorrà per la spedizione?
A1: Di solito viene spedito entro 7 giorni lavorativi.

 

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Q5: Qual è la tua quantità di ordine minimo?
A5: 1Kit.

 

Q6: Qual è il metodo di spedizione?
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